Mündəricat:

Klonları necə seçirsiniz?
Klonları necə seçirsiniz?

Video: Klonları necə seçirsiniz?

Video: Klonları necə seçirsiniz?
Video: Qizil klon lar. #Sonamemmedova#model_gold#Sumqayitqizilsatisi#qizilklon 2024, Noyabr
Anonim

Nə vaxt seçmək a klon , köklərin güclü, ağ və həvəslə böyüyən mühitdən çıxdığından əmin olun. Köklər qəhvəyi və büzüşübsə və ya başqa bir şəkildə hərəkətsiz görünürsə, onu geri qoyun və daha yaxşısını axtarın.

Bundan əlavə, tək bir hüceyrəni necə klonlaşdırmaq olar?

  1. Tərkibində 200 µL mühit olan 96 quyuluq boşqabın birinci quyusuna (A1) ~16,000 hüceyrə qoymaq üçün hüceyrələri sayın.
  2. A1 tərkibli hüceyrələrdən 100 µL çıxarın və B1 ilə qarışdırın, 100 µL çıxarmadan və C1 ilə qarışdırmadan əvvəl yaxşıca qarışdırmaq üçün 3 dəfə yuxarı və aşağı pipetlə keçirin.

Həmçinin, məməlilərin hüceyrə koloniyasını necə seçirsiniz? Fərqlənməmiş sağlamı seçmək üçün lövhəni mikroskop altına qoyun koloniyalar . Koloniyaları seçin 10ul-a təyin edilmiş P-20 pipetkasından istifadə etməklə. Diqqətlə seçin a koloniya parçalamadan koloniya təkliyə hüceyrələr , və onu tripsin ilə 96 quyu boşqabına köçürün. Dağıtmaq üçün bir neçə dəfə yuxarı və aşağı pipetlə koloniya.

Müvafiq olaraq, bir klon silindrindən necə istifadə edirsiniz?

İstifadə steril orta forseps, götürün a klonlama silindr . Düz dibinə yumşaq bir şəkildə basın silindr hamar silikon yağa daxil edin və ani şaquli hərəkətlə çıxarın. Düzgün aparılarsa, bu, yağın dibinə bərabər paylanmasını təmin edəcəkdir silindr . təyin edin silindr koloniya üzərində.

Sabit hüceyrə xətləri üçün koloniyaları necə seçirsiniz?

Sabit hüceyrə xətləri yaratmaq üçün protokol aşağıda göstərildiyi kimi bir neçə addım tələb edir:

  1. Optimal seçim antibiotik konsentrasiyasını müəyyən etmək üçün öldürmə əyrisi yaradın.
  2. İstədiyiniz plazmid konstruksiyaları olan hüceyrələrin transfektasiyası
  3. Stabil poliklonal koloniyaları seçin və genişləndirin.
  4. Məhdud seyreltmə və genişlənmə ilə tək klonları müəyyən edin.

Tövsiyə: