Həddindən artıq məhdudlaşdırıcı ferment əlavə etsəniz nə olar?
Həddindən artıq məhdudlaşdırıcı ferment əlavə etsəniz nə olar?

Video: Həddindən artıq məhdudlaşdırıcı ferment əlavə etsəniz nə olar?

Video: Həddindən artıq məhdudlaşdırıcı ferment əlavə etsəniz nə olar?
Video: Armuddan ay işığı 2024, Noyabr
Anonim

Natamam həzm baş verə bilər çox olduqda və ya da az ferment istifadə olunur. The tərkibində çirkləndiricilərin olması the DNT nümunəsi bacarmaq maneə törətmək fermentlər , həmçinin natamam həzmlə nəticələnir. Bəziləri məhdudlaşdırıcı fermentlər tam fəaliyyət üçün kofaktorlar tələb olunur.

Bundan əlavə, niyə məhdudlaşdırıcı fermentlər ən son əlavə olunur?

The məhdudlaşdırıcı ferment adətən olur sonuncu komponent əlavə etdi ekstremal şəraitə məruz qalmamasını təmin etmək üçün reaksiyaya. Yığılmış reaksiya sonra qarışdırılmalıdır ferment əlavə. Tərkibindəki bütün məhlulları qarışdırın məhdudlaşdırıcı fermentlər qarşısını almaq üçün yumşaq ferment inaktivasiya.

Bundan əlavə, məhdudlaşdırıcı fermentin həzmini necə yaxşılaşdırmaq olar? Tövsiyə olunandan çox istifadə edin ferment məbləği (məsələn, 10 vahid ferment mikroqram DNT üçün). miqdarını azaldın ferment lazım gələrsə reaksiyada. Uzun müddətli inkubasiyadan çəkinin həzm reaksiya. Tövsiyə olunan reaksiya tamponundan istifadə edin.

Onu da bilin ki, məhdudlaşdırıcı ferment niyə kəsilmir?

Parçalanacaq DNT-nin hazırlanması etməlidir fenol, xloroform, spirt, EDTA, yuyucu vasitələr və ya həddindən artıq duzlar kimi çirkləndiricilərdən təmizlənməlidir, bunların hamısı məhdudlaşdırıcı ferment fəaliyyət. Əgər inhibitor (çox vaxt duz, EDTA və ya fenol) varsa, nəzarət DNT-si olacaq kəsilmir qarışdırdıqdan sonra.

Niyə fermentin miqdarı ulduz aktivliyinə səbəb ola bilər?

Ulduz fəaliyyətidir məhdudiyyətin spesifikliyinin yumşaldılması və ya dəyişdirilməsi ferment vasitəçiliyi ilə DNT-nin parçalanması bacarmaq üçün optimal olanlardan əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənən reaksiya şəraitində baş verir ferment . Ulduz fəaliyyəti ola bilər Mg olması səbəbindən baş verir2+, kimi edir məsələn, HindIII-də görünür.

Tövsiyə: