Gibson klonlaması necə işləyir?
Gibson klonlaması necə işləyir?

Video: Gibson klonlaması necə işləyir?

Video: Gibson klonlaması necə işləyir?
Video: Les Paul Melody Maker: как Gibson глумится над своими обожателями. 2024, Noyabr
Anonim

The Gibson Klonlama Master Mix bir tamponda üç müxtəlif fermentdən ibarətdir. Hər bir fermentin reaksiya üçün spesifik və unikal funksiyası var: T5 Exonuclease - DNT 5' ucundan geri çeynəməklə tək zəncirli DNT 3' çıxıntıları yaradır. Tamamlayıcı DNT fraqmentləri sonradan bir-birinə bağlana bilər.

Bunu nəzərə alsaq, Gibson necə işləyir?

The Gibson Assembly® metodu, məhdudlaşdırıcı ferment həzminə və ya uyğun məhdudlaşdırma sahələrinə ehtiyac olmadan iki və ya daha çox fraqmentin klonlanmasına imkan verən klonlaşdırma prosedurudur. Bunun əvəzinə, istifadəçi tərəfindən müəyyən edilmiş üst-üstə düşən uclar bitişik fraqmentlərin qüsursuz birləşməsinə imkan vermək üçün fraqmentlərə daxil edilir.

Eynilə, Gibson Assembly Master Mix-də nə var? The Gibson Klonlama Master Qarışığı bir tamponda üç müxtəlif fermentdən ibarətdir. Hər bir fermentin reaksiya üçün spesifik və unikal funksiyası var: T5 Exonuclease - DNT 5' ucundan geri çeynəməklə tək zəncirli DNT 3' çıxıntıları yaradır. Tamamlayıcı DNT fraqmentləri sonradan bir-birinə bağlana bilər.

Bu şəkildə, Golden Gate montajı necə işləyir?

Qızıl Qapı klonlama və ya Golden Gate montajıdır tədqiqatçıya Type IIs məhdudlaşdırıcı fermentlər və T4 DNT liqazından istifadə edərək eyni vaxtda və istiqamətli olaraq bir neçə DNT fraqmentini bir parçaya yığmağa imkan verən molekulyar klonlama üsulu. Bu məclisdir in vitro həyata keçirilir.

Gateway klonlaması necə işləyir?

The GATEWAY Klonlama Texnologiya faq l tərəfindən öz DNT-ni E-yə inteqrasiya etmək üçün istifadə edilən sahəyə məxsus rekombinasiya sisteminə əsaslanır. Daxil edilmiş faq DNT-ni əhatə edən attL və attR saytları faq l-də attP sahəsini islahat etmək üçün eksizyon hadisəsi zamanı xüsusi olaraq rekombinasiya edir. E-dəki attB saytı.

Tövsiyə: