Mündəricat:

Bir geni plazmidə necə yerləşdirirsiniz?
Bir geni plazmidə necə yerləşdirirsiniz?

Video: Bir geni plazmidə necə yerləşdirirsiniz?

Video: Bir geni plazmidə necə yerləşdirirsiniz?
Video: ТАПОЧКИ - СЛЕДКИ клиньями на двух спицах. Подробный мастер класс. 2024, Noyabr
Anonim

Əsas addımlar bunlardır:

  1. Açın plazmid və "yapışdırın" gen . Bu proses məhdudlaşdırıcı fermentlərə (DNT-ni kəsən) və DNT liqazına (DNT-ni birləşdirən) əsaslanır.
  2. Daxil edin the daxil plazmid bakteriya.
  3. Çox böyüsün plazmid -bakteriyaları daşıyır və onlardan zülal hazırlamaq üçün "fabrik" kimi istifadə edirlər.

Həmçinin, bir gen plazmid GCSE-yə necə daxil edilə bilər?

bu plazmidə daxil edilir ligaza fermentlərindən istifadə etməklə. the plazmid gedir daxil bakteriya hüceyrəsi. transgen bakteriya çoxalır, nəticədə in insan insulini istehsal edən milyonlarla eyni bakteriya.

Bundan əlavə, bir geni necə alt klonlayırsınız? üçün əsas addımlar Subklonlaşdırma Siz əlavənizi ana vektordan azad edirsiniz və təmizləyirsiniz, bu inserti hazırlanmış təyinat vektoruna bağlayır, bu bağlama reaksiyasını səlahiyyətli bakteriya hüceyrələrinə çevirirsiniz. Sonra daxiletmə üçün dəyişdirilmiş hüceyrələri ekranlaşdırırsınız.

Bunu nəzərə alaraq, gen klonlamasının 4 addımı hansılardır?

Klassik məhdudlaşdırıcı ferment həzm və ligasiya klonlama protokollarında hər hansı DNT fraqmentinin klonlaşdırılması dörd addımdan ibarətdir:

  • maraq doğuran DNT-nin (və ya hədəf DNT) təcrid edilməsi;
  • bağlama,
  • transfeksiya (və ya çevrilmə) və.
  • yoxlama/seçim proseduru.

Plazmidi necə gücləndirirsiniz?

Eksperimental Prosedur

  1. PCR-ni işə salın və PCR məhsulunu təmizləyin: Daxil edilmiş DNT-ni gücləndirmək üçün PCR-i işə salın.
  2. DNT-nizi həzm edin:
  3. Gel təmizləyərək insertinizi və vektorunuzu təcrid edin:
  4. İnsertinizi vektorunuza bağlayın:
  5. Transformasiya:
  6. Bitmiş plazmidi təcrid edin:
  7. Plazmidinizi ardıcıllıqla yoxlayın:

Tövsiyə: