Video: Sanger DNT ardıcıllığı necə işləyir?
2024 Müəllif: Stanley Ellington | [email protected]. Son dəyişdirildi: 2023-12-16 00:13
Sanger ardıcıllığı 3 'sonunda dideoksinükleotidlərlə sona çatan müxtəlif uzunluqdakı uzatma məhsullarının meydana gəlməsi ilə nəticələnir. Uzatma məhsulları daha sonra Kapilyar Elektroforez və ya CE ilə ayrılır. Molekullar elektrik cərəyanı ilə jel polimerlə dolu uzun bir şüşə kapilyara enjekte edilir.
Bu şəkildə, DNT ardıcıllığının Sanger üsulu nədir?
Sanger ardıcıllığı , zəncir sonu olaraq da bilinir üsul üçün bir texnikadır DNT sıralaması tərəfindən zəncirvari sonlanan dideoksinükleotidlərin (ddNTPs) seçici şəkildə daxil edilməsinə əsaslanır. DNT in vitro zamanı polimeraz DNT replikasiya. Frederik tərəfindən hazırlanmışdır Sanger və 1977 -ci ildə həmkarları.
Həmçinin, zəncirin dayandırılması ardıcıllığı necə işləyir? Sanger DNT sıralama kimi də tanınır zəncir - xitam üsulu sıralama . ddNTP-lər nəticələnir xitam ddNTP-lərdə nükleotidlər arasında fosfodiester bağının əmələ gəlməsi üçün lazım olan 3'-OH qrupu olmadığı üçün DNA zəncirinin. Bu bağ olmadan, zəncir əmələ gələn nukleotidlərdən ibarətdir sona çatdı.
Sadəcə olaraq, biz niyə Sanger ardıcıllığını edirik?
Sanger ardıcıllığıdır a üsul -nin DNT sıralaması tərəfindən seçilmiş zəncir sonlandırıcı dideoksinükleotidlərin daxil edilməsinə əsaslanır DNT in vitro zamanı polimeraz DNT replikasiya. Qısa oxumaq üzərində hələ də üstünlüyü var sıralama texnologiyaları (Illumina kimi) ki, o bacarmaq istehsal edir DNT ardıcıllığı > 500 nukleotid oxuyur.
Sanger ardıcıllığı dəqiqdirmi?
Sanger ardıcıllığı 99,99% ilə dəqiqlik klinik tədqiqatlar üçün “qızıl standart”dır sıralama . Bununla birlikdə, yeni NGS texnologiyaları daha yüksək məhsuldarlıq qabiliyyətinə və nümunə başına daha aşağı xərclərə görə klinik tədqiqat laboratoriyalarında da yayılmağa başlayır.
Tövsiyə:
Rekombinant DNT-ni necə müəyyən etmək olar?
Rekombinant DNT (və ya rDNT) iki və ya daha çox mənbədən DNT-ni birləşdirərək hazırlanır. Praktikada proses tez-tez müxtəlif orqanizmlərin DNT-sinin birləşməsini nəzərdə tutur. Proses məhdudlaşdırma yerləri adlanan xüsusi nukleotid əsasları ardıcıllığı ilə müəyyən edilmiş nöqtələrdə DNT molekullarını kəsmək və yenidən birləşmək qabiliyyətindən asılıdır
Restriksiya fermentləri DNT-ni necə manipulyasiya edir?
Bakteriya bakteriofaqlar və ya faglar adlanan bakterial viruslardan müdafiə etmək üçün məhdudlaşdırıcı fermentdən istifadə edir. Bir faj bir bakteriyaya yoluxduqda, DNT-ni bakteriya hüceyrəsinə daxil edir ki, onun çoxalması mümkün olsun. Restriksiya fermenti faj DNT-ni çoxlu hissələrə ayıraraq onun təkrarlanmasının qarşısını alır
PCR dideoksi DNT ardıcıllığında necə rol oynayır?
PCR dideoksi DNT sıralanmasında necə rol oynayır? PCR-in istifadəsi şablon DNT-nin daha aşağı səviyyələrindən aşkar edilə bilən DNT sintez səviyyələrini əldə etməyə imkan verir. Nə üçün DNT ardıcıllığı zamanı dideoksinukleotidin daxil olması “replikasiyanı dayandıran” hadisə kimi müəyyən edilir?
Sanger ardıcıllığı nə qədər dəqiqdir?
99,99% dəqiqliklə Sanger ardıcıllığı klinik tədqiqat ardıcıllığı üçün “qızıl standart”dır. Bununla belə, daha yeni NGS texnologiyaları daha yüksək ötürmə qabiliyyətinə və nümunəyə görə aşağı qiymətə görə klinik tədqiqat laboratoriyalarında geniş yayılmışdır
Sanger ardıcıllığı ilə növbəti nəsil ardıcıllığı arasındakı fərq nədir?
Yeni nəsil ardıcıllıq (NGS) texnologiyaları oxşardır. Sangersequencing və NGS arasındakı kritik fərq ardıcıllıq həcmidir. Sanger metodu yalnız bir DNT fraqmentini müəyyən bir zamanda ardıcıllıqla sıralasa da, NGS kütləvi şəkildə paraleldir və hər bir qaçışda eyni vaxtda milyonlarla fraqmenti ardıcıllıqla sıralayır